【Thorax】严重失代偿的肺动脉高压患者肺毛细血管中的血小板聚集

据报道，约有20%的肺动脉高压（PH）患者会出现血小板减少症。PH的严重程度可能导致血小板最低值更加明显。由于存在多种混杂因素，导致PH患者血小板减少症的机制仍然在很大程度上是未知的。有研究表明，PH中的血小板减少症可能并非源于血小板消耗的增加。急性PH失代偿会导致肺部血流障碍、内皮功能障碍和炎症，所有这些都可能促进血小板的聚集和隔离。

研究假设

在失代偿的PH患者中，血小板减少症可能至少部分是由于肺部的血小板聚集所致。

患者和方法

这项由法国麻醉与重症监护研究伦理委员会批准的回顾性研究（IRB 00010254-2023-069）旨在比较肺移植后取出的肺组织中的血小板计数和毛细血管内血小板的丰度。

研究入选了105名在2012年7月至2022年7月期间接受高优先级肺移植的PH患者。为了实现研究目的，纳入标准包括急性PH失代偿（定义为外周灌注压降低以及器官衰竭），需要使用儿茶酚胺治疗，并且患者在接受肺移植前被送入重症监护室。此外，排除了慢性血栓栓塞性PH患者。要求纳入患者在PH失代偿时提供血小板计数，并且有移除肺组织的石蜡包埋样本。符合这些标准的16名患者根据血小板计数分为两组：血小板减少症组（<150 G/L，组1，n=8）和正常血小板计数组（≥150 G/L，组2，n=8）。此外，选择了7名无PH和血小板减少症的移植患者作为对照组。

在肺组织切片中，通过免疫组织化学（IHC）鉴定并计数了血小板聚集体和巨核细胞。IHC的标记物包括CD41（CD41克隆EP178，稀释比例为1:100；Vitro Master Diagnostica）和CD61（CD61克隆EP65，稀释比例为1:100；Bio SB）抗人兔单克隆抗体。此外，研究使用扫描电子显微镜（SEM）对石蜡包埋组织切片进行了观察（见图1），样本来自一名严重血小板减少症患者（图1C）和一名对照患者。

研究结果

血小板聚集体和巨核细胞分别通过免疫组化鉴定为CD41+或CD61+的棕色免疫标记点或特征性细胞（见图1A和1B）。此外，扫描电子显微镜（SEM）观察也证实了毛细血管内存在血小板聚集体（图1C）。

与对照组相比，组1中的CD41+血小板聚集体数量显著增加（p=0.018），而组2中数量增加但无显著性差异（p=0.08）。此外，组1中的血管内CD41+巨核细胞数量相比对照组接近显著性差异（p=0.059）。

在所有研究患者中，CD41+和CD61+血小板聚集体的数量呈显著相关性；同样，CD41+和CD61+巨核细胞的数量、CD41+血小板聚集体与CD41+巨核细胞的数量，以及CD61+血小板聚集体与CD61+巨核细胞的数量之间也均呈显著相关。

血小板计数与肺部CD41+血小板聚集体和巨核细胞数量显著相关（图1D），类似的相关性也在CD61+血小板聚集体和巨核细胞中得到了体现。

在移植后第1天（中位数1天 [四分位数范围 1–5]），患者的血小板计数恢复正常（>150 G/L），平均血小板计数为177±29 G/L。

图1. 主要结果概述。(A, B）肺组织切片的免疫组织化学检测。每位患者随机选取远端肺实质的代表性样本进行分析，使用了四个切片，其中两个分别用于抗CD41和抗CD61的免疫染色。每位患者均检测了一张CD41标记的切片和一张CD61标记的切片，由CM和J-F B同时阅片。棕色染色结果通过与抗人CD41（克隆EP178，稀释1:100；Vitro Master Diagnostica）或抗人CD61（克隆EP65，稀释1:100；Bio SB）抗体孵育后，再使用3,3'-二氨基联苯胺（DAB）染色显现。（1）显示毛细血管内的CD41+血小板聚集体（绿色箭头）（2）显示毛细血管内的CD61+巨核细胞（黑色箭头）。同型对照均为阴性（未显示）。（C）石蜡包埋肺组织切片的扫描电子显微镜（SEM）观察结果。切片脱蜡后进行了戊二醛固定，并使用日立SU3500扫描电子显微镜进行观察。样本来自一名严重血小板减少症患者。图中框1显示了充满红细胞的毛细血管，框2显示了包含血小板聚集体的毛细血管。（D）散点图显示了来自三组患者的血小板计数（G/L）（y轴）与原生肺组织中CD41+血小板聚集体数量（x轴）之间的相关性（R=0.53，P=0.009）。

总之，研究表明，在急性PH失代偿期间，血小板可能在肺内聚集。如果确实如此，血小板输注可能是危险的，最好避免，除非患者有活动性出血或刚开始肺移植手术。

参考文献：

Miard C, de Montpreville VT, Bernaudin JF, Adam J, Djediat C, Stephan F. Platelet aggregates in lung capillaries in severely decompensated pulmonary hypertension. Thorax. 2024 Oct 7:thorax-2024-222034. doi: 10.1136/thorax-2024-222034. Epub ahead of print. PMID: 39375039.