基于RNA序列揭示肝纤方潜在的抗纤维化机制

肝纤维化是由肝炎病毒感染、自身免疫性肝病、酒精性或非酒精性脂肪肝等急性或慢性肝病引起的组织学改变。肝纤维化的主要病理特征是细胞外基质（ ECM）成分的过度沉积，破坏了正常的肝脏结构和功能，导致肝硬化失代偿和肝癌的发生。因此，有效逆转肝纤维化非常重要。目前除病因治疗外，尚无治疗肝纤维化的特效药。近几十年的研究表明，中医药（TCM）治疗在肝纤维化防治领域显示出疗效优势因此，中药治疗肝纤维化具有广阔的前景。

肝纤方（GXF）方是总结《金龟药略》中的中药方剂而得。结合重庆市中医院刘华宝教授的临床经验，GXF进一步优化。此方共含五味药：黄芩、苦参、防风、陈皮和西洋参。现代药理学研究表明，据报道，GXF 中的黄芩和防风草可以减轻炎症。此外，据报道，苦参还具有抗纤维化作用。GXF在重庆地区已普遍使用，临床保肝效果显着。经过大量临床观察，发现70.3%的乙型肝炎和酒精性肝病引起的肝硬化患者，以及Child-Pugh A或B级，经GXF治疗后可逆转。对于 Child–Pugh C 级患者，GXF 治疗可以稳定肝功能并降低门静脉高压。

GXF 减轻了 CCl 4诱导的大鼠肝损伤和肝纤维化：

方法：采用 UPLC-MS/MS 检测 GXF 的主要化合物。通过血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 水平和组织病理学变化评估 GXF (1.58, 3.15, 4.73 g/kg/day) 和扶正化瘀 (FZHY, 阳性对照, 0.47 g/kg/day) 的疗效. 通过将总肝脏 RNA 测序 (RNA-seq) 数据与最近的肝脏单细胞测序 (scRNA-seq) 研究相结合，探索了潜在的机制。通过肝星状细胞（HSC）-T6系验证了GXF的潜在药效物质。

RNA测序分析：

结果：UPLC-MS/MS鉴定了GXF中的主要化合物，包括黄芩苷、汉黄芩苷和苦参碱等。在GXF高剂量处理下，CCl 4诱导ALT和AST升高显着降低，GXF-大剂量处理的保护作用优于FZHY。GXF大剂量治疗后肝脏组织病理学改变得到缓解，ISHAK评分显示肝硬化（F5/F6）的发生率从76.5%降至55.6%。肝脏羟脯氨酸含量结果与组织病理学变化一致。RNA-seq分析显示差异基因（DEGs）主要富集在ECM-受体相互作用和趋化因子信号通路中。GXF有效抑制胶原沉积并显着下调CCL2以抑制肝组织中巨噬细胞的募集。整合 scRNA-seq 数据显示，GXF 有效抑制瘢痕相关 Trem2 + CD9 +的扩增巨噬细胞亚群和受损肝脏中产生 PDGFRα + PDGFRβ +瘢痕的肌成纤维细胞，并通过调节配体-受体相互作用（包括 TGFβ/EGFR、PDGFB/PDGFRα 和 TNFSF12/TNFRSF12a 信号传导）重塑纤维化生态位。体外实验表明，GXF中的黄芩苷、苦参碱和橙皮苷可抑制肝星状细胞的活化。

GXF在CCl 4诱导的肝纤维化中的分子机制示意图：

此研究中，通过 UPLC-MS/MS 鉴定了 GXF 式的主要化合物。通过抑制巨噬细胞的募集和改善肝星状细胞的微环境验证了GXF具有抗纤维化作用。综上所述，该研究揭示了GXF配方潜在的抗纤维化机制，为进一步研究和临床应用提供科学依据。

原文：Liu Z, Xiang H, Xiang D, Xiao S, Xiang H, Xiao J, Ren H, Hu P, Liu H, Peng M. Revealing potential anti-fibrotic mechanism of Ganxianfang formula based on RNA sequence. Chin Med. 2022 Feb 18;17(1):23. doi: 10.1186/s13020-022-00579-7. PMID: 35180857; PMCID: PMC8855591.