CLIN CHEM：集成极速实时PCR和高速熔融分析可在52 - 87秒完成检测
2019-02-07 MedSci MedSci原创
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30秒内的极速PCR和<5秒内PCR产物的高速溶解是DNA分析周转时间的方面所取得的最新进展。先前，这些步骤是在不同的专业工具上进行的。本文介绍了将极速PCR和高速熔解与实时荧光监测相结合的检测和基因分型。
在66.4°C和93.7°C之间使用循环时间快达1.05 s的微流体平台进行速度增强，终点熔化速率为8°C / s。增加引物和聚合酶浓度以允许短循环时间。合成序列用于通过实时PCR和在同一仪器上高速融化来扩增乙型肝炎病毒（70bp）和艰难梭菌（83bp）的片段。还进行了在F2 c。* 97，F5 c.1601，MTHFR c.665和MTHFR c.1286 的30个人基因组样品的盲法基因分型研究。
结果显示当总循环时间减少到<1分钟时，标准快速循环PCR化学不产生任何产物。然而，增加引物（5μmol/ L）和聚合酶（0.45U /μL）浓度可以进行有效扩增。传染性靶标在52至71秒内被扩增和鉴定。来自人DNA的单核苷酸变体的实时PCR和基因分型在75至87秒内实现，并且与已知基因型100％一致。
研究结果表明，高速融解的极速PCR可在约1分钟内完成。极速PCR和高速熔解的整合表明，未来的分析检测在识别，定量和变异分型方面是可行的。
原始出处：
Joseph T. Myrick, Robert J. Pryor, Robert
A. Palais, Integrated Extreme Real-Time PCR and High-Speed Melting Analysis in
52 to 87 Seconds
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作者：MedSci
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