CLIN CHEM：实体器官移植后采用无探针数字PCR定量方法检测供体特异性游离DNA

2017-03-21 MedSci MedSci原创

器官移植数字PCR游离DNA

供体特异性游离DNA（dscfDNA）越来越被认为是一种用于监测移植健康和诊断实体器官移植后排斥反应的非侵入性生物标志。然而，当前用于测量dscfDNA的方法既昂贵又费力。使用小的缺失或插入多态性（DIP）的无探针数字PCR（ddPCR）方法可以在不影响对dscfDNA的定量的同时克服这些局限。该方法被称为PHABRE-PCR（Primer to Hybridize across an Allel

近日，临床化学杂志（Clinical Chemistry）在线发表了澳大利亚墨尔本大学关于在实体器官移植后检测捐赠者特异性游离DNA的方法。

供体特异性游离DNA（dscfDNA）越来越被认为是一种用于监测移植健康和诊断实体器官移植后排斥反应的非侵入性生物标志。然而，当前用于测量dscfDNA的方法既昂贵又费力。使用小的缺失或插入多态性（DIP）的无探针数字PCR（ddPCR）方法可以在不影响对dscfDNA的定量的同时克服这些局限。该方法被称为PHABRE-PCR（Primer to Hybridize across an Allelic BREakpoint-PCR）。通过将引物放置在能够确保高度特异性PCR扩增的等位基因断裂点结合处，然后通过无探针ddPCR对供体特异性等位基因进行绝对定量。

在此项研究中，研究人员对3个肝移植接受者的dscfDNA进行连续测量。首先针对一组DIP，对捐赠者和接受者基因组DNA进行基因分型以鉴定捐赠者特异性等位基因。然后选择能够将捐赠者特异性DNA和接受者特异性DNA区分开的的等位基因对接受者血浆中的dscfDNA进行定量。

非靶向等位基因的不扩增证实了PHABRE-PCR的高度特异性。在接受移植的接受者中，在第3天dscfDNA增加，但在没有发生任何并发症的2名接受者中dscfDNA逐渐降低并在2周后稳定在低浓度。在第3名移植受者中，dscfDNA的显著增加与排斥反应的发作一致。

研究表明，PHABRE-PCR能够以高特异性及灵敏性对的dscfDNA进行定量。基于DIP的方法使得对dscfDNA的监测能够作为评估实体器官移植后移植健康的一种潜在的测量手段。

原始出处：

Su Kah Goh, Vijayaragavan Muralidharan, Alexander Dobrovic, et al. Probe-Free Digital PCR Quantitative Methodology to Measure Donor-Specific Cell-Free DNA after Solid-Organ Transplantation.CLIN CHEM. Vol. 63, Issue 3.

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