病理诊断是通过手术切除、内镜活检、细针穿刺等方式获取人体组织或细胞,借助显微镜等工具对样本进行一系列处理和观察,研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能和代谢等方面的改变,揭示疾病的发生发展规律,从而阐明疾病本质的医学科学,是绝大部分疾病,尤其是肿瘤疾病的诊断“金标准”。
根据样本类型可分为组织学检查、细胞学检查两类。
二者取样方式并不相同,组织学样本一般通过开放手术、内镜检查或经皮穿刺活检获取,而细胞学样本一般通过体液、拉网、细针穿刺、脱落细胞等途径获取。
组织学检查和细胞学检查是病理诊断的两类基本方式,通常称为组织病理和细胞病理,主要进行的是形态学观察。
通过分别与免疫诊断、分子诊断相结合,病理诊断形成了另外两个重要分支:免疫病理和分子病理,将病理诊断从组织、细胞水平的形态学观察深入到蛋白与分子水平。
一、组织病理
组织学检查一般可分为石蜡切片和术中冰冻切片两种制片方式,二者应用场景不同,各有优劣。
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石蜡切片应用最为广泛,但制片过程较为繁琐,耗时较长,一般需要3-5天才能出具结果,但清晰度较高,并且可以长期保存使用;
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冰冻切片一般用于手术中快速诊断,通过低温将组织快速冷却硬化,仅需半小时左右即可 出具诊断结果,但制片质量不如石蜡切片,存在一定误诊率,对病理医师要求较高。
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TCT:利用将宫颈脱落细胞洗入细胞保存液瓶中,刮片毛刷在小瓶内搅拌,通过高精密度过滤膜过滤将标本中的杂质分离,取滤后的上皮细胞制成直径为20 mm薄层细胞于载玻片上,而后进行固定、染色、封片。
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LCT/LBP:采用两次离心及独立染色,在自动化、标准化等方面具有较大优势,可以实现对病理诊断质量的良好控制,目前已成为我国主流细胞学制片方式。除主要应用于宫颈细胞学检测以外,在痰、胸腹水、尿液、肺泡灌洗液等非妇科样本检测方面更具优势。
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第一代定性PCR:通过琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行分析,分析仅停留在定性或半定量层面,且检测时间长、有交叉感染风险。
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第二代qPCR(实时荧光定量PCR):在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线实现定量分析,数据采集可在PCR扩增过程中完成。
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第三代dPCR(数字PCR):基于芯片式液滴微流控技术,将一个样本分成几万到几百万份,分配到不同的反应单元,每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA 模板) ,在每个反应单元中分别对目标分子进行 PCR 扩增,扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析,可以对实现绝对定量检测。
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检测灵敏度高,可检测肿瘤细胞中突变比例为1%甚至更 低的突变基因; -
适用于片段化DNA,利于开展分子病理诊断(由于甲醛的固定处理,石蜡包埋标本组织的DNA 大部分片段化); -
结合qPCR实现闭管操作,可减少污染的可能性。
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